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产品介绍

• 高转化体产出：对于细胞壁 (+) 藻株，使用该试剂能够获得超过 1000 个转化体 /μg DNA；对于细胞壁 (-) 藻株，也可获得超过 100 个转化体 /μg DNA。

• 广泛的 DNA 适用性：该试剂不仅可以转化环状或线性 DNA，还能对 PCR 片段进行有效转化，为科研人员提供了更灵活的实验选择。

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实验步骤（以使用 BioRad® Gene Pulser® II 转化莱茵衣藻为例）

1. 细胞复苏与培养

从冷冻状态中复活 1 瓶莱茵衣藻细胞，将其接种到 200 mL 的 TAP 培养基中。TAP 培养基为莱茵衣藻的生长提供了必要的营养物质。在标准培养条件下（如适宜的光照、温度和气体环境）培养细胞，并持续监测细胞浓度，这一过程持续 3 天。细胞浓度的监测对于后续实验的成功至关重要，因为不同生长阶段的细胞对转化操作的响应可能不同。

2. 细胞收获

当细胞浓度达到 1×10⁶ - 2×10⁶ 个细胞 /mL 时，此时细胞处于早期对数阶段，是进行转化操作的理想状态。将培养物以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，使细胞沉淀下来。小心弃去上清液，并尽可能完全地除去残留的液体，以避免杂质对后续实验的干扰。需要注意的是，如果细胞浓度略低于 1×10⁶ 个细胞 /mL，仍然可以进行细胞收获操作，一般不会对转化效率产生显著影响，但细胞的活力和状态应尽量保持良好。

3. 细胞清洗

将细胞沉淀重悬于 10 mL Plus - Trans 转化试剂中，这一步骤可以使细胞与转化试剂充分接触，为后续的转化过程做好准备。然后以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，再次沉淀细胞。弃去上清液，并仔细除去所有残留液体。重复这一清洗步骤，即再次将沉淀重悬于 10 mL Plus - Trans 转化试剂中，以 2500 rpm 离心 5 分钟，进一步确保细胞表面的杂质被去除。

4. 细胞重悬

将经过清洗的细胞重悬于 Plus - Trans 转化试剂中，调整细胞浓度至终浓度为 2×10⁸ - 3×10⁸ 个细胞 /mL。合适的细胞浓度对于提高转化效率至关重要，过高或过低的细胞浓度都可能影响 DNA 与细胞的相互作用。

5. DNA 孵育

每 250 μL 细胞悬液中加入 2 - 4 μg 线性化 DNA，然后将混合物在 4°C 下孵育 5 分钟。低温孵育可以使 DNA 与细胞表面的受体更好地结合，同时减少核酸酶对 DNA 的降解作用。

6. 电穿孔参数设置

在 BioRad® Gene Pulser® II 电穿孔仪上设置特定的电穿孔参数：电压为 500V，电容为 50 μF，电阻为 800Ω。这些参数是经过优化的，能够在保证细胞存活的前提下，使细胞膜形成合适大小的穿孔，便于 DNA 进入细胞。

7. 样品准备

在进行电穿孔之前，将 250 μL 细胞 - DNA 混合物转移到预先在冰上放置的冰冷比色皿中。低温环境可以保持细胞的活性和 DNA 的稳定性。

8. 电穿孔操作

使用设置好的参数对细胞进行电穿孔。通常情况下，电脉冲持续时间约为 30 毫秒。在电脉冲的作用下，细胞膜会形成瞬间的小孔，使 DNA 能够进入细胞内部。

9. 电穿孔后处理

电穿孔完成后，让细胞在冰上放置 15 分钟。这一过程有助于细胞膜的修复，减少细胞损伤，提高细胞的存活率。

10. 细胞转移与孵育

在室温下，将细胞转移到含有 10 mL TAP - 40 mM 蔗糖溶液的 50 mL 锥形管或烧瓶中。蔗糖溶液可以提供一定的渗透压保护，防止细胞因渗透压变化而受损。然后将细胞放入藻室中孵育 14 - 16 小时，让细胞在适宜的环境中恢复和表达外源基因。

11. 细胞收集与重悬

将孵育后的细胞以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，收集细胞沉淀。弃去上清液，并将沉淀重悬于 200 μL TAP 培养基中。

12. 细胞铺板与筛选