|
GeneticPure质粒大提试剂盒可用于从细菌培养物中大量制备转染级质粒DNA(最多500μg质粒),使用离子交换技术,不同于国内其他厂商的硅胶模方法,机子交换技术质粒得率更高,质粒纯度会高出很多。分离得到的质粒适用于大多数分子生物学应用 常用用途
特点和优势GeneticPure质粒大提试剂盒使用改良的碱性裂解法,可大量制备高纯度的质粒DNA。 质量 已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试;根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示,在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。 用250μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时,回收率高于90%。通过从DH5a细胞中分离pBS,确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的150ml培养物中,获得超过500μg的质粒DNA。 纯度(利用A260/A280比率进行检测)为1.8±0.2。 利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。 已经根据当前的质量控制流程,检测发现试剂盒组分不含核酸酶。 制备说明分离流程基于改良的碱性裂解法,可分为以下步骤:细菌被部分裂解,使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心,除去裂解物中的细胞碎片,并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡离子交换柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上,使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后,从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来,以除去盐并浓缩质粒。 分析说明样品: 含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:100至200mL细菌培养物 含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:200至500mL细菌培养物 质粒大小:分离流程适用于所有大小的质粒。注意:较大构建体(高达100 kb)的裂解液应通过过滤而不是离心来净化,以避免剪切质粒。 所需时间:75分钟(包括过滤裂解液) 一般产量: 高拷贝数质粒:3至5 μg/mL培养物 低拷贝数质粒:0.2至1 μg/mL培养物 产物纯度:分离的质粒DNA不含其他细菌成分,包括RNA。 |