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首页 >> 产品中心 >>分子试剂系列 >> GeneticPure离子交换质粒大抽试剂盒
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GeneticPure离子交换质粒大抽试剂盒

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GeneticPure质粒大提试剂盒可用于从细菌培养物中大量制备转染级质粒DNA(最多500μg质粒),使用离子交换技术,不同于国内其他厂商的硅胶模方法,机子交换技术质粒得率更高,质粒纯度会高出很多。分离得到的质粒适用于大多数分子生物学应用

常用用途

  • 1)转染

  • 2)Southern印迹

    3)测序

  • 4)PCR/长片段PCR

  • 5)限制性酶切消化

  • 6)克隆


特点和优势

GeneticPure质粒大提试剂盒使用改良的碱性裂解法,可大量制备高纯度的质粒DNA。

质量

已对使用该试剂盒纯化得到的质粒DNA进行了限制性酶切消化测试;根据实验方案所述方法从转化HB101中分离得到pUC 19。如琼脂糖凝胶分析所示,在+ 37℃下使用1单位Msp I将1μg质粒完全酶解2小时。

用250μg纯化质粒测试质粒回收率。超螺旋形式大于80%时,回收率高于90%。通过从DH5a细胞中分离pBS,确定质粒DNA的产量。从A600密度为3-6的150ml培养物中,获得超过500μg的质粒DNA。

纯度(利用A260/A280比率进行检测)为1.8±0.2。

利用通过标准方法纯化并通过琼脂糖凝胶电泳检测的3 μg pBS分析RNA污染。结果未检测到RNA。

已经根据当前的质量控制流程,检测发现试剂盒组分不含核酸酶。

制备说明

分离流程基于改良的碱性裂解法,可分为以下步骤:细菌被部分裂解,使质粒DNA透过细胞壁进入上清液。较大的大肠杆菌染色体DNA被困在细胞壁中。通过过滤或离心,除去裂解物中的细胞碎片,并将含有质粒DNA的组分上样到预平衡离子交换柱上。由于净化的裂解物溶于低盐缓冲液后再上样到柱上,使得质粒DNA与柱中的大孔阴离子交换材料结合。用高盐洗涤液从柱上洗脱细胞杂质。 最后,从柱上洗脱质粒DNA。将回收的DNA从洗脱液中沉淀出来,以除去盐并浓缩质粒。

分析说明

样品:
含有高拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:100至200mL细菌培养物
含有低拷贝数质粒的大肠杆菌培养物:200至500mL细菌培养物
质粒大小:分离流程适用于所有大小的质粒。注意:较大构建体(高达100 kb)的裂解液应通过过滤而不是离心来净化,以避免剪切质粒。
所需时间:75分钟(包括过滤裂解液)
一般产量:
高拷贝数质粒:3至5 μg/mL培养物
低拷贝数质粒:0.2至1 μg/mL培养物
产物纯度:分离的质粒DNA不含其他细菌成分,包括RNA。


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