Phusion100 High Fidelity DNA Polymerase Master Mix (2X) 聚合酶 master mix 是一种专为高效 PCR 扩增而精心设计的直接使用型混合物。在众多 DNA 聚合酶中,Phusion100 DNA 聚合酶脱颖而出,其错配率比 Taq 低 100 倍,比 Pfu 低 12 倍。如此显著的低错配率特性,使其成为克隆以及其他对保真度要求极高的应用的理想之选。相较于其他 DNA 聚合酶,Phusion100 DNA 聚合酶展现出卓越的性能稳定性。即便在存在 PCR 抑制剂的复杂环境下,它也能高效工作,且能以更低的酶量实现更高的产物产率,同时还能有效缩短实验方案所需的时间。
当使用 Phusion100 热启动高保真 DNA 聚合酶时,其独特的设计机制发挥着关键作用。该聚合酶与一种特异性配体呈可逆性结合,这种配体能够在室温条件下精准抑制 DNA 聚合酶的活性。这一特性具有重要意义,在 PCR 反应的构建过程中,室温下聚合酶活性被抑制,从而有效避免了非特异性产物的生成。这使得实验结果更加准确可靠,减少了后续分析的干扰因素。
配体不仅能抑制 DNA 聚合酶的活性,还能对聚合酶的 3′→5′核酸外切酶活性起到抑制作用。在反应构建过程中,这种抑制作用能够防止引物和模板 DNA 被降解,确保反应体系中引物和模板的完整性,为后续的扩增反应提供良好的基础。
在达到促进聚合酶活性的适宜温度时,配体从聚合酶上释放,使聚合酶完全活化。Phusion100 热启动 DNA 聚合酶具有快速响应的特点,在较高温度下能立即重新激活。这意味着在 PCR 实验方案中,无需设置单独的激活步骤,进一步简化了实验流程,提高了实验效率。
室温反应构建便利性:允许在室温环境下进行反应构建,操作更加灵活便捷,无需额外的温度控制设备和复杂的操作步骤。
防止非特异性扩增与引物降解:在反应构建期间,能够有效避免非特异性扩增的发生,同时防止引物降解,保证了反应的特异性和准确性,为实验结果的可靠性提供了保障。
独特热启动实现零时重新激活:凭借独特的热启动技术,聚合酶在达到适宜温度后能立即重新激活,无需额外的激活时间,大大缩短了整个 PCR 反应的时间。
高保真性能:具有高达 100 倍于 Taq 聚合酶的高保真度,能够准确地复制 DNA 序列,减少错配的发生,适用于对序列准确性要求极高的实验。
加快 PCR 速度:缩短了延伸时间,仅需 15 - 30 秒 / 千碱基(kb),从而显著加快了 PCR 的整体速度,提高了实验效率。
反应稳定性与低优化需求:反应过程稳定,受外界因素影响较小,几乎无需进行复杂的优化操作,降低了实验的难度和成本。
低酶量高产率:能够用极低的酶量生成更多的产物,有效降低了实验成本,同时也减少了酶对反应体系的潜在影响。
绿色缓冲液直接上样:提供 Green 缓冲液,使用该缓冲液的反应产物可直接上样至凝胶进行电泳分析,无需额外的处理步骤,进一步简化了实验流程。
高保真 PCR:由于其高保真特性,非常适合进行高保真 PCR 实验,确保扩增得到的 DNA 序列与原始模板高度一致。
高通量测序:在高通量测序实验中,需要准确的 DNA 模板,Phusion100 聚合酶的高保真度和高效扩增能力能够满足高通量测序对模板质量和数量的要求。
难以扩增(高 GC 含量)模板:对于高 GC 含量等难以扩增的模板,Phusion100 聚合酶凭借其稳定的性能和高效的扩增能力,能够有效克服扩增困难,获得高质量的扩增产物。
获得测序模板:能够为测序实验提供高质量的模板,确保测序结果的准确性和可靠性。
多重 PCR:在多重 PCR 实验中,需要同时扩增多个目标片段,Phusion100 聚合酶的高特异性和稳定性能够保证各个目标片段的准确扩增。
长片段 PCR:适用于长片段 DNA 的扩增,能够准确、高效地扩增较长的 DNA 片段,满足相关实验的需求。
克隆:其高保真度和高效扩增能力使其成为克隆实验的理想选择,能够准确地复制目标基因,提高克隆的成功率。
诱变:在诱变实验中,需要准确地对特定区域进行突变,Phusion100 聚合酶的高保真度能够确保突变的准确性和可控性。
微阵列:可为微阵列实验提供高质量的 DNA 样本,保证微阵列实验结果的准确性和可靠性。